氨基酸分析儀是進(jìn)行氨基酸分離、衍生和檢測(cè)的自動(dòng)化分析系統(tǒng)，也被稱(chēng)為氨基酸檢測(cè)儀的儀器，是采用經(jīng)典的陽(yáng)離子交換色譜分離、茚三酮柱后衍生法，對(duì)蛋白質(zhì)水解液及各種游離氨基酸的組分含量進(jìn)行分析。

此氨基酸分析儀被廣泛用于制藥、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、育種、學(xué)研究、臨床診斷和地質(zhì)考察等領(lǐng)域。指標(biāo)信息： 分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留時(shí)間重現(xiàn)性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 峰面積重現(xiàn)性：RSD≤1% (水解，所有峰)。

1.原理

測(cè)定原理是利用樣品各種氨基酸組分的結(jié)構(gòu)不同、酸堿性、極性及分子大小不同，在陽(yáng)離子交換柱上將它們分離，采用不同pH值離子濃度的緩沖液將各氨基酸組分依次洗脫下來(lái)，再逐個(gè)以另*路的茚酮試劑混合，然后共同流至螺旋反應(yīng)管中，于一定溫度下(通常為115～120℃)進(jìn)行顯色反應(yīng)，形成在570nm有*大吸收的藍(lán)紫色產(chǎn)物。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，其*大吸收在440nm。這些有色產(chǎn)物對(duì)570nm、440nm光的吸收強(qiáng)度與洗脫出來(lái)的各氨基酸的濃度(或含量)之間的關(guān)系符合比耳定律，可與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸比較作定性和定量測(cè)定。

2.操作方法

① 樣品處理：

測(cè)定樣品中各種游離氨基酸含量，可以除去脂肪雜質(zhì)后，直接上柱進(jìn)行分析。

測(cè)定蛋白質(zhì)的氨基酸組成時(shí)樣品必須經(jīng)酸水解，使蛋白質(zhì)完全變成氨基酸后才上柱進(jìn)行分析。

②樣品分析：經(jīng)過(guò)處理后的樣品上柱進(jìn)行分析。上柱的樣品量根據(jù)所用自動(dòng)分析儀的靈敏度來(lái)確定。一般為每種氨基酸0.1μmol 左右(水解樣品干重為0.3mg 左右)。測(cè)定必須在pH5～5.5、100℃下進(jìn)行，反應(yīng)進(jìn)行時(shí)間為10～15min，生成的紫色物質(zhì)在570nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行比色測(cè)定。而生成的黃色化合物在440nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行比色測(cè)定。做一個(gè)氨基酸全分析一般只需1h 左右，同時(shí)可將幾十個(gè)樣品一起裝入儀器，自動(dòng)按序分析，*后自動(dòng)計(jì)算給出*的數(shù)據(jù)。儀器*度在±1～3%，用陽(yáng)離子交換柱分離及測(cè)定氨基酸。

3.結(jié)果計(jì)算

帶有數(shù)據(jù)處理機(jī)的儀器，各種氨基酸的定量結(jié)果能自動(dòng)打印出來(lái)，否則，可用尺子測(cè)量。

峰高或用峰高乘以半峰寬確定峰面積進(jìn)而計(jì)算出氨基酸的*含量。另外，根據(jù)峰出現(xiàn)的時(shí)間可以確定氨基酸的種類(lèi)。

4.說(shuō)明

①近年出現(xiàn)的采用反相色譜原理制造的氨基酸分析儀，可使蛋白質(zhì)水解出的17 種氨基酸在12min 內(nèi)完成分離，且具有靈敏度高(*小檢出量可達(dá)1pmol)、重現(xiàn)性好以及一機(jī)多用等優(yōu)點(diǎn)。

②顯色反應(yīng)用的茚三酮試劑，隨著時(shí)間推移發(fā)色率會(huì)降低，故在較長(zhǎng)時(shí)間測(cè)樣過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)采用已知濃度的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液上柱測(cè)定以檢驗(yàn)其變化情況。

5.應(yīng)用舉例

(一)學(xué)上的應(yīng)用

氨基酸代謝異常角度闡述了氨基酸與肝性腦病的關(guān)系

腫瘤組織氨基酸代謝的變化規(guī)律

必需氨基酸在創(chuàng)傷愈合中的關(guān)系

血清中11種游離氨基酸的降低可直接影響人體組織的正常發(fā)育、生長(zhǎng)

(二)飼料上的應(yīng)用

質(zhì)量控制

各種飼料必需氨基酸的含量和它們之間的比例必須恰當(dāng)，測(cè)定原料和產(chǎn)品中的氨基酸含量，以達(dá)到保證質(zhì)量的目的。

真?zhèn)舞b別

魚(yú)粉氨基酸組成特點(diǎn)是賴(lài)氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析結(jié)果很容易*可以辨別真?zhèn)巍?/span>

(三)農(nóng)業(yè)、食品、飲料及其它

對(duì)醬油級(jí)別的認(rèn)定

檢驗(yàn)測(cè)定茶氨酸來(lái)鑒別真?zhèn)尾枞~

對(duì)果汁、飲料進(jìn)行真?zhèn)蔚蔫b別

對(duì)玉米、大豆、小麥等農(nóng)作物的氨基酸含量進(jìn)行檢測(cè)

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